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上海烜雅生物科技有限公司
入驻年限：9 年
- 联系人：
黄经理
- 所在地区：
上海 奉贤区
- 业务范围：
试剂、抗体、细胞库 / 细胞培养、ELISA 试剂盒、耗材、体外诊断、实验室仪器 / 设备、技术服务
- 经营模式：
生产厂商 科研机构 代理商 经销商
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公司新闻/正文
细胞复苏、传代、冻存操作流程
9874 人阅读发布时间：2026-05-14 14:21
| 仪器 | 试剂 | 耗材 |
| 离心机 | 胎牛血清（FBS） | 离心管（15ml、50ml） |
| 生物安全柜 | 无菌 1×PBS pH=7.2 | T-25 细胞培养瓶 |
| 电动移液器 | 0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA | 一次性无菌移液管（2ml、5ml、10ml） |
| CO2 培养箱 | 完全培养基（含血清） | 1.8mL 冻存管 |
| 倒置显微镜 液氮罐 |
冻存液：90%FBS+10%DMSO 异丙醇 |
程序降温盒 |
| 恒温水浴锅 | ||
| 超低温冰箱 |
二、操作流程：
复苏
1.将恒温水浴锅中的水预热到 37℃；
2.准备一支 15ml 离心管，加入 5ml 含 10% FBS 的完全培养基，放入 37℃ 水浴锅中预热；
3.戴上护目镜，厚毛线手套后，从液氮罐中取出要复苏的细胞，尽快转入 37℃ 恒温水浴锅中复温晃动冻存管以提高复温速率；
4.将融化了的冻存管中的细胞吸入事先准备的离心管中，混匀后，1000rpm 离心 5min；
5.准备一个 T-25 培养瓶，写上细胞名称、日期，再加入 4ml 完全培养基；
6.离心完成后弃去上清，用 1ml 完全培养基重悬细胞后，转入 T-25 细胞培养中，混匀后转入CO2 培养箱中培养静置。
的液氮，之后拧紧冻存管，置于干冰上，然后放入 37℃ 水浴中，避免温差太大造成液氮快速气
化而爆炸。
传代 （细胞传代建议一传二）
1.当细胞汇合度达到 85% 以上时，可进行传代。
2.在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，收集瓶内的培养基；
3.向培养瓶内加入 3ml 无菌的 1×PBS 后，水平放置培养瓶，使 PBS 能够浸润到培养瓶底面上所有的面积，吸弃 PBS；
4.向瓶内加入消化液 1ml ，浸润底面后放入 37℃ CO2 培养箱中孵育 1~2min；
5.孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，若全部消化下来则直接向培养瓶内加入 2ml 含 10%FBS 的完全培养基中，将悬液吸入 15ml 离心管；
① 准备一个无菌的 15ml 离心管，加入 2ml 含 10%FBS 的完全培养基；
② 将消化下来的细胞吸入①中的离心管内中和（避免吹打）；
③ 向之前消化的培养瓶中加入 1ml 胰酶继续消化 2min 左右，轻拍培养瓶，95% 左右细胞脱
落后加入 2ml 含 10%FBS 的完全培养基中和，中和后的细胞悬液移入①中的离心管内
7.准备两个新的 T-25 培养瓶，各加入 4ml 完全培养基。
8.离心完成后，弃上清，用 2ml 完全培养基重悬离心细胞，将重悬后的细胞转入 2 个 T-25 培养瓶，每个培养瓶各 1ml；
9.水平放置培养瓶，震荡混匀后，将培养瓶置于 37℃，5%CO2 培养箱中静置培养。
冻存 （细胞冻存建议每瓶 T25 冻一支）
1~6参照传代步骤