上海烜雅生物科技有限公司
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上海 奉贤区
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试剂、抗体、细胞库 / 细胞培养、ELISA 试剂盒、耗材、体外诊断、实验室仪器 / 设备、技术服务
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细胞培养知识传授1
人阅读 发布时间：2018-10-08 17:38
收细胞的大部分常规步骤
一、贴壁细胞
1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲，然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代；
2.待细胞长满瓶底面积80%-90%。需要对其进行传代，第一次传代比例为1:2。
3.传代步骤：将0.25%含EDTA胰酶置于37℃预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入1mLPBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1mL预热好的胰酶，置于37℃孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆，轻抬瓶壁 见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1mL完全培养基中止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
二、悬浮细胞
1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，然后置于无菌操作台，打开瓶口，轻轻吹打后，将其中的细胞悬液转移到离心管中，然后1200rpm离心3min，去上清；
2.将离心好的细胞转移至T-25瓶中并加入5-6mL 新鲜培养基，然后将其置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液（离心后去旧液，加入新鲜培养基）；
3.显微镜观察细胞数目比较多时，对其进行传代，第一次传代比例为1:2（离心后平均分成两瓶培养）。
一、贴壁细胞
1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲，然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代；
2.待细胞长满瓶底面积80%-90%。需要对其进行传代，第一次传代比例为1:2。
3.传代步骤：将0.25%含EDTA胰酶置于37℃预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入1mLPBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1mL预热好的胰酶，置于37℃孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆，轻抬瓶壁 见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1mL完全培养基中止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
二、悬浮细胞
1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，然后置于无菌操作台，打开瓶口，轻轻吹打后，将其中的细胞悬液转移到离心管中，然后1200rpm离心3min，去上清；
2.将离心好的细胞转移至T-25瓶中并加入5-6mL 新鲜培养基，然后将其置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液（离心后去旧液，加入新鲜培养基）；
3.显微镜观察细胞数目比较多时，对其进行传代，第一次传代比例为1:2（离心后平均分成两瓶培养）。
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